ARMS技术的解析（一）

ARMS技术分析(一)

ARMS-PCR:扩增难突变系统PCR

as-PCR :等位基因特异性PCR (或 ASA-PCR)

dF ARMS-PCR:双荧光扩增难治突变系统PCR

扩增抗性突变系统(arms)，也称为等位基因特异性扩增(asa)，是牛顿等人首次建立的检测已知突变的方法。

ARMS的基本原理是，如果引物的3’端碱基与模板碱基不互补，就不能用一般的耐热DNA聚合酶进行延伸。因此，根据已知的点突变设计了两条引物，它们的3’端碱基分别与突变的和正常的模板碱基互补，从而区分出有点突变的模板和正常的模板。这种方法已经被用于检测许多疾病中的点突变。

aspcr(等位基因特异性pcr) 的基本思想是设计两个ASO-F引物，与另一个引物r形成一个PCR反应体系，这两个ASO-F引物与探针的ASO不同，等位基因特异性碱基不位于ASO的中间，而是位于ASO-F引物的3’端。本设计基于耐热Taq DNA聚合酶缺乏3' → 5切除纠正活性的特点，保真的聚合酶具有3'→5 '核酸外切酶活性，而普通Taq DNA聚合酶仅具有5' → 3聚合酶活性和核酸外切酶活性，而缺乏3' → 5核酸外切酶活性，因此其扩增片段错配率远高于保真。引物3’端的特异性碱基分别与野生型和突变型等位基因的相对碱基互补。如果这个碱基对错配，则扩链反应会受到3’，5-磷酸二酯键形成的阻碍，所以这种方法也被称为扩增难治突变系统(ARMS)。扩增结果如下:“野生”模板被封闭，“突变”引物被扩增；或者“突变”模板阻断，“野生”引物扩增。

ASPCR点突变的检出率取决于反应条件的优化和防止引物与靶DNA错配时错配延伸，可以通过调整实验条件如引物、靶DNA、Taq酶浓度和反应温度来提高特异性，在反应体系中加入甲酰胺也可以减少非特异性扩增。错误的延伸也可以通过人为错配引物3’端的第二个碱基来防止。TaqDNA聚合酶缺乏3′→5核酸外切酶活性，因此3′端错配的引物比正常端对的引物延伸速度慢。当错配碱基数达到一定程度或条件达到一定严格程度时，3’端碱基因难以形成磷酸二酯键而无法延伸，反应终止，无法获得特定长度的扩增带。如果聚合酶链反应结果可以获得特定长度的扩增带，则表明模板DNA存在对应于引物3’端的突变。

最近，据报道，在ARMS反应系统中，两种不同的荧光素，FAM和维克，被标记在引物上。首先运行普通PCR，最后用qPCR扫描平板。通过分析产物的荧光，可以知道模板中是否存在点突变。这种方法被称为双荧光扩增难治突变系统(DFARMS)。

第一部分介绍arm技术的市场应用:厦门爱得和英国DxS。

Amoydx: adx-arms 环形引物双扩增技术；

Dxs:蝎臂 蝎探针:该技术使用的探针为 蝎 探针，是一种新型探针，由发夹探针和引物组成，探针的/[/k0/。end and 3 & # 39；末端标记有报告荧光和淬灭荧光，3 & # 39；通过聚合酶链反应阻断剂(一种非扩增单体，防止退火后探针延伸)和引物5 & # 39；结束连接。在自由状态下，报道的荧光和淬灭的荧光非常接近，没有产生荧光。在变性阶段，打开茎环，引物与模板结合并在退火过程中延伸，环区与新合成的靶基因的互补区结合。此时， 蝎 探针和 PCR 产物在同一条带  DNA/[/K0/。由于发夹结构是开放的，报告荧光和淬灭荧光是分离的，因此可以检测到来自报告荧光的荧光信号。因为 Scorpion 探针中的序列特异性引物和探针在同一分子上，所以信号产生得非常快。